α-SynucleinのN末端にHisタグを付与してタンパク質合成を行った場合、Hisタグの配列によっては、合成量が低下することがあります。この合成量の低下を、Hisタグの遺伝子配列を変えるだけで、改善できることを確認しました。

合成・SDS-PAGEのプロトコル

使用したキット：PUREfrex^®2.0（#PF201-0.25）
目的のタンパク質：Hisx6-α-Synuclein（Homo sapiens）
分子量：15,427 Da
反応液量：10 µL
合成温度：37 °C
合成時間：4 時間
SDS-PAGEアプライ量：1 µL
ゲル濃度：10-20 % gradient
ゲル染色：CBB

Hisタグの遺伝子配列が異なる2種類の鋳型DNAを作成

鋳型DNAは、開始コドン直後にHisタグ、Gly、Serと続き、その下流にα-Synucleinの2Aspから140Alaで構成されています。

合成結果

鋳型DNAのN末端から9アミノ酸のGC含量が低くなる方の鋳型DNAから合成したタンパク質の方が、GC含量が高くなる鋳型DNAよりも多く合成される結果が得られました。この結果から、Hisタグの配列をcatにすることで、Hisタグを付けたことによる合成の低下を改善することができます。

N末端の配列をATリッチにすることで、タンパク質の合成量が改善されます。他のタンパク質について調べた結果をポスター発表しておりますので、こちらもご覧ください。