タンパク質の種類によっては、正しい高次構造の形成や維持に、ジスルフィド結合 (disulfide bond、SS結合など) が必要な場合があります。今回は、活性を示すのに、ジスルフィド結合が正しく形成される必要なタンパク質を、ジスルフィド結合形成を促進する添加剤を用いて、合成し活性を比較しました。
添加剤は、下記の２種類を使用しています。
ジスルフィド結合の形成は、酸化剤である GSSG のみで可能な場合や、ジスルフィド結合異性化活性を有する DsbC や PDI が必要な場合があります。酸化剤である GSSG は、Ero1α のように PDI も酸化しますが、反応液全体も酸化方向にもっていく役割があります。一方で、Ero1α は、PDI を特異的に酸化する酵素であるため、反応液全体を酸化に傾けたくない場合は、Ero1α をおすすめします。
Plasminogen activator
| Organism | Homo sapiens |
| Synthesized region | 36Ser – 40Ile / 211Gly – 562Pro (+FLAG) |
| UniProt ID | P00750 |
| Length | 368 a.a. |
| Molecular weight | 41,072 Da |
| No. of disulfide bonds | 9 |
Acetylcholinesterase
| Organism | Homo sapiens |
| Synthesized region | 32Glu – 614Leu (+FLAG – His6) |
| UniProt ID | P22303 |
| Length | 602 a.a. |
| Molecular weight | 66,812 Da |
| No. of disulfide bonds | 4 (intermolecular: 1) |
Luciferase (Gaussia princeps)
| Organism | Gaussia princeps |
| Synthesized region | 18Lys – 185Asp (+FLAG-His6) |
| UniProt ID | Q9BLZ2 |
| Length | 187 a.a. |
| Molecular weight | 20,407 Da |
| No. of disulfide bonds | 5 |
Immunogloblin (Trastuzmab)
| Organism | humanized monoclonal antibody (IgG1 kappa) |
| Synthesized region | Heavy chain (HC): 1Gln – 451Lys (+FLAG) Light chain (LC): 1Asp – 214Cys |
| Length | HC: 462 a.a. / LC: 215 a.a. |
| Molecular weight | HC: 50,618 Da / LC: 23,573 Da |
| No. of disulfide bonds | 16 (intermolecular: 4) |
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