PUREfrex®1.0
こちらの製品のお見積およびご注文に関するお問い合わせは、コスモ・バイオ(株)様までお願いいたします。
PUREfrex®1.0 は PURE system を基に開発された再構成型無細胞タンパク質合成キットで、転写・翻訳・エネルギー再生に必要なタンパク質、リボソームから構成されています。
PUREfrex®1.0 は、分子シャペロンを含んでおりません。そのため、合成するタンパク質によっては、正しい高次構造が形成できず、不溶性となる場合もあります。このような場合には、分子シャペロンをタンパク質合成時に添加することにより解決できることがあります。本キットへの添加剤として、DnaK mix（#PF003-0.5）とGroE mix（#PF004-0.5）もご用意いたしております。
PUREfrex®1.0 は、DTT（反応液中の終濃度は 2mM）を含んでいるため還元的条件下でタンパク質の合成反応を行います。ジスルフィド結合（SS結合；SS-bond または、ジスルフィド架橋；disulfide bridge）の形成が必要なタンパク質を合成される場合は、DsbC Set（旧 DS supplement；#PF005-0.5）あるいはPDI Set（#PF006-0.5）を添加してお使い頂くことをお奨めいたします。
| 製品番号 | 製品名 | 容量 | 国内法規制*1 | 価格（税抜） | 製品添付文書 | 取扱い説明書*2 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| PF001-0.25 | PUREfrex® 1.0 | 250 μL 反応用 | 非該当 | 15,000円 |  |
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| PF001-0.25-5 | PUREfrex® 1.0 | 5X 250 μL 反応用 | 非該当 | 67,500円 | |
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*1) 化学物質排出把握管理促進法、労働安全衛生法、毒劇及び劇物取締法、遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律（通称「カルタヘナ法」）
*2) PUREfrex® 2.0 を使用した反応例を示していますが、鋳型DNAの作製方法などをご参照ください。
製品構成
PUREfrex®1.0の各Solutionに含まれる内容物の詳細については、下記ダウンロードください。
Download PUREfrex®1.0 Contents（66KB）
| ソリューション | 容量 | 内容 | 開封後保存温度 *1 |
|---|---|---|---|
| Solution I | 125 μL | アミノ酸、NTP、tRNA、酵素の基質など | -20℃ |
| Solution II | 12.5 μL | タンパク質 (30% グリセロール溶液) | -20℃もしくは-80℃ *2 |
| Solution III | 12.5 μL | リボソーム (20 μM) | -80℃ *2 |
| DHFR DNA *3 塩基配列 |
10 μL | 大腸菌 DHFR 遺伝子を含む PCR産物 (20ng/μL) | -20℃ |
*1) キット開封前は、-80℃で保存してください。
*2) 使用後の残りの反応液を-80℃で保存する場合、液体窒素やドライアイス／エタノールなどで急速凍結してから保存してください。必要に応じて分注し、凍結融解の繰り返しをできるだけ避けてください。
*3) タンパク質合成の陽性コントロール用として使用する際は、20μLの合成反応液に、1μLを添加してください。
使用方法
PUREfrex®1.0 を用いたタンパク質合成は、任意の反応液量で行うことができます。例えば、20μLで行う場合は以下のように反応液を調製してください。
- Solution Iを、室温～37℃で1分間ほど温めて完全に融解し、氷上に置きます。
- Solution IIとSolution IIIを氷上で融解します。
- 融解したSolution I、IIおよびIIIを軽くボルテックスした後、遠心して内容物をチューブ下部に集めます。
- 以下のように反応液を調製します。(DNAは、1kbpあたり0.5-3 ng/μLになるように添加してください。)
Water 8-X μL Solution I 10 μL Solution II 1 μL Solution III 1 μL 鋳型DNA 注1 X μL Total 20 μL - 37℃のヒートブロック又はウォーターバスで2～4時間反応させて、タンパク質を合成します。注2
- 合成されたタンパク質を、それぞれの目的に使用します。注3
注意点
注1) 鋳型DNAは、目的のタンパク質に合わせてお客様の方でご用意ください。調製方法に関しましては、鋳型DNAのサイトをご覧ください。
注2) 気相の恒温槽（培養用恒温器など）で反応すると、反応液の温度の上昇に時間がかかり、合成量が低くなります。
注3) SDS-PAGEによる合成の確認は反応液を水で希釈してから泳動してください。詳細は、こちらのサポート情報よりダウンロードください。
使用上の注意
PUREfrex®は研究用試薬です。ヒトを含む動物などへの投与、臨床、診断など他の用途への使用を禁じます。また、食品、家庭用には使用しないでください。
PUREfrex®を使用する際には、RNaseフリーの水、試薬、器具類を使用してください。また、手袋、マスクの着用をお勧めします。
