PUREfrex®1.0

製品のお見積およびご注文に関するお問い合わせは、コスモ・バイオ(株)様までお願いいたします。

2022年12月より、PUREfrex® キットに含まれるSolution Iの原材料を変更いたしました。詳細につきましてはこちらをご覧ください。　【重要】Solution Iの原材料変更のお知らせ

2023年10月より、PUREfrex® 1.0キットにつきまして、一部構成因子およびリボソームの製造方法を変更いたしました。詳細につきましてはこちらをご覧ください。【重要】構成因子の一部変更のお知らせ　【重要】リボソーム製造方法変更のお知らせ

2024年11月より、新たに「50 mL 反応用」の規格を提供させていただきます。詳細につきましてはこちらをご覧ください。新製品のお知らせ【大容量! 50 mL規格】

 

PUREfrex®1.0 は PURE system を基に開発された再構成型無細胞タンパク質合成キットで、転写・翻訳・エネルギー再生に必要なタンパク質、リボソームから構成されています。活性型タンパク質の発現の他、ディスプレイ法や、翻訳メカニズムの研究など、幅広い用途にご利用いただけます。

PUREfrex®1.0 は、分子シャペロンを含んでおりません。そのため、合成するタンパク質によっては正しい高次構造が形成できず、不溶性となる場合もあります。このような場合には、分子シャペロンをタンパク質合成時に添加することにより解決できることがあります。本キットへの添加剤として、DnaK mix（#PF003）とGroE mix（#PF004）もご用意しております。

PUREfrex®1.0 は、DTT（反応液中の終濃度は 2mM）を含んでいるため、還元条件下でタンパク質の合成反応を行います。ジスルフィド結合（SS結合；SS-bond または、ジスルフィド架橋；disulfide bridge）の形成が必要なタンパク質を合成される場合は、DsbC Set（#PF005）あるいはPDI Set（#PF006）を添加してお使い頂くことをお奨めいたします。

製品番号 製品名 容量 国内法規制 *1 希望販売価格 *2 製品添付文書 取扱い説明書 *3 SDS
PF001-0.25 PUREfrex® 1.0 250 μL 反応用 非該当 15,000円 PDF PDF PDF
PF001-2ML PUREfrex® 1.0 2 mL 反応用 *4 非該当 105,000円 PDF
PF001-10ML PUREfrex® 1.0 10 mL 反応用
(5X 2 mL) *4		 非該当 440,000円 PDF
PF001-50ML PUREfrex® 1.0 50 mL 反応用
(25X 2 mL) *5		 非該当 1,950,000円 PDF

*1) 化学物質排出把握管理促進法、労働安全衛生法、毒劇及び劇物取締法、遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律（通称「カルタヘナ法」）

*2) 記載の希望販売価格は、予告なく改定される場合があります。また、「希望販売価格」は参考価格であり、販売店様からの実際の販売価格ではございません。ご注文の際には販売店様へご確認ください。表示価格に消費税は含まれておりません。

*3) PUREfrex® 2.0 を使用した反応例を示していますが、鋳型DNAの作製方法などをご参照ください。

*4) より少量での分注をご希望の場合は、チューブ１本あたり700円（税別）で承ります。

*5) 50 mL規格につきましては、2.0 mLより大きい容量での分注をご希望の場合、ご希望のサイズに応じて無償で承ります。

製品構成

PUREfrex®1.0の各Solutionに含まれる内容物の詳細については、下記よりダウンロードいただけます。

Download PUREfrex®1.0 Contents（66KB）

250 µL 反応用

ソリューション 容量 内容 開封後保存温度 *1
Solution I 125 μL アミノ酸、NTP、tRNA、酵素の基質など -20℃
Solution II 12.5 μL タンパク質 (30% グリセロール溶液) -20℃もしくは-80℃ *2
Solution III 12.5 μL リボソーム (20 μM) -80℃ *2
DHFR DNA *3
塩基配列		 10 μL 大腸菌 DHFR 遺伝子を含む PCR産物 (20 ng/μL) -20℃

2 mL 反応用

ソリューション 容量 内容 開封後保存温度 *1
Solution I 1000 μL アミノ酸、NTP、tRNA、酵素の基質など -20℃
Solution II 100 μL タンパク質 (30% グリセロール溶液) -20℃もしくは-80℃ *2
Solution III 100 μL リボソーム (20 μM) -80℃ *2
DHFR DNA *3
塩基配列		 10 μL 大腸菌 DHFR 遺伝子を含む PCR産物 (20 ng/μL) -20℃

*1) キット開封前は、-80℃で保存してください。

*2) 使用後の残りの反応液を-80℃で保存する場合、液体窒素やドライアイス／エタノールなどで急速凍結してから保存してください。必要に応じて分注し、凍結融解の繰り返しをできるだけ避けてください。

*3) タンパク質合成の陽性コントロール用として使用する際は、20 μLの合成反応液に、1 μLを添加してください。

 

分注方法

　　PUREfrex®キットは、-80℃で保管している間に劣化していくことはほとんどありませんが、凍結融解を繰り返すと活性が低下していくことがあります。そのため、１回あたりの使用量が少ない場合は、お客様の方で試薬を分注して保存いただくことをお薦めしております。少量で分注される場合は、低吸着チューブをご使用頂くとより安心です。

[Solution I]
室温～37℃で５分ほどインキュベートし、完全に透明になるまでしっかりと混合します。その後、氷上には置かずに分注作業を行い、-20℃以下で凍結してください。

[Solution II]
氷上で融解させ、しっかりと混合（少量の場合は泡立たない程度のボルテックスも可）した後に分注し、液体窒素（あるいはドライアイスとエタノールを混合した寒剤）を用いて急速凍結させた後に、-20℃以下で保存してください。

[Solution III]
氷上で融解させ（溶けた状態で長時間放置しないでください）、しっかりと混合した後に分注し、液体窒素（あるいはドライアイスとエタノールを混合した寒剤）を用いて急速凍結させた後に、-80℃で保存してください。分注したSolution IIIを急速凍結せずに、そのまま-80℃の冷凍庫で凍らせてしまうと活性の低下につながります。

使用方法

PUREfrex®1.0 を用いたタンパク質合成は、任意の反応液量で行うことができます。例えば、20 μLで行う場合は以下のように反応液を調製してください。

  1. Solution Iを、室温～37℃で5分間ほど温めて完全に融解し、室温に置きます。
  2. Solution IIとSolution IIIを氷上で融解します。
  3. 融解したSolution I、IIおよびIIIを軽くボルテックスした後、遠心して内容物をチューブ下部に集めます。
  4. 以下のように反応液を調製します。(DNAは、1kbpあたり0.5-3 ng/μLになるように添加してください。)
    Water 8-X μL
    Solution I 10 μL
    Solution II 1 μL
    Solution III 1 μL
    鋳型DNA 注1 X μL
    Total 20 μL
  5. 37℃のヒートブロック又はウォーターバスで2～4時間反応させて、タンパク質を合成します。注2
  6. 合成されたタンパク質を、それぞれの目的に使用します。注3

注意点

注1) 鋳型DNAは、目的のタンパク質に合わせてお客様の方でご用意ください。調製方法につきましては、「鋳型DNAについて」のページをご覧ください。

注2) 気相の恒温槽（培養用恒温器など）で反応すると、反応液の温度の上昇に時間がかかり、合成量が低くなります。

注3) SDS-PAGEによる合成の確認は反応液を水で希釈してから泳動してください。詳細は、サポート情報の「PUREfrex反応液のSDS-PAGE」をご覧ください。

使用上の注意

PUREfrex®は研究用試薬です。ヒトを含む動物などへの投与、臨床、診断など他の用途への使用を禁じます。また、食品、家庭用には使用しないでください。
PUREfrex®を使用する際には、RNaseフリーの水、試薬、器具類を使用してください。また、手袋、マスクの着用をお勧めします。